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1. 預(yù)期用途

材料 18/118 是凍干、純化的基因組 DNA (gDNA)從 HCT 15 人細胞系中提取,。該材料與 PIK3CA c.1633G>A (E545K) 相關(guān)的共有變異百分比,，以及每個二倍體人類基因組質(zhì)量的共有變異和總 PIK3CA 拷貝數(shù)?？梢酝ㄟ^應(yīng)用計算（參見附錄 I）來稀釋材料,，以產(chǎn)生 PIK3CAc.1633G>A (E545K) 變體百分比范圍內(nèi)的標準品。該材料旨在用作校準二級標準,、試劑盒和測定的主要標準,。該材料不用作運行控制。該材料經(jīng)過外部實驗室測試,，表明適合作為下一代測序 (NGS) 和數(shù)字 PCR (dPCR) 的標準,。除了 PIK3CA c.1633G>A (E545K) 臨床相關(guān)變體外，該材料還包含可用于 NGS 檢測驗證的非臨床相關(guān)變體（參見附錄 II）,。該材料由世界衛(wèi)生組織 (WHO) 生物標準化專家委員會于 2019 年制定,，作為 WHO 第一個 HCT 15 癌癥基因組國際標準，NIBSC 材料代碼 18/118,。

NIBSC 18/118 HCT 15 癌癥基因組(標準品）

2. 注意

該制劑不適用于人類食物鏈中的人類或動物,。

該制劑含有人類來源的材料，經(jīng)血清學(xué)檢測發(fā)現(xiàn) HIV 1 和 2 Ab/Ag 檢測和 HBsAg（Hep b 表面抗原）陰性,，NAT（核酸檢測）檢測發(fā)現(xiàn) HCV 陰性,。但是，不能消除活病毒存活的可能性,。與所有生物來源的材料一樣,，這種制劑應(yīng)被視為對健康有潛在危害。應(yīng)根據(jù)您自己實驗室的安全程序使用和丟棄它,。此類安全程序應(yīng)包括戴防護手套和避免產(chǎn)生氣溶膠,。打開安瓿或小瓶時應(yīng)小心謹慎，以免割傷,。

3. 單元

該材料在一項涉及 35 個實驗室和 38 種測試方法的國際合作研究中進行了測試,。從 NGS 和 dPCR 獲得基因型和共有變異百分比（表 1）。最終用戶能夠使用基于變體和總基因拷貝數(shù)全二倍體人類基因組的稀釋公式進一步稀釋材料（使用野生型材料 18/164,，或校準到材料 18/164 的另一種野生型基因組 DNA）

質(zhì)量,，以在較低的一致變異百分比范圍內(nèi)達到進一步的標準，從該范圍內(nèi)可以進行測定校準見第 7 節(jié),。

4. 內(nèi)容

生物材料原產(chǎn)國：英國,。

編碼安瓿含有大約 5 μg 從人類細胞系中提取的凍干純化基因組 DNA。使用“鹽析”方法提取 gDNA，并在冷凍干燥前在 Tris-EDTA 緩沖液 5mg/ml 海藻糖中稀釋,。

NIBSC 18/118 HCT 15 癌癥基因組(標準品）

5. 存儲

將所有未開封的凍干材料安瓿存放在 - 或以下,。

請注意：由于凍干材料固有的穩(wěn)定性，NIBSC 可能會在環(huán)境溫度下運輸這些材料,。

6. 開瓶指南

DIN 安瓿瓶有一個“易開”顏色的壓力點,，窄的安瓿桿在此與較寬的安瓿瓶主體相連。各種類型的安瓿破碎機可商購獲得,。要打開安瓿,，輕輕敲擊安瓿以收集底部（標記）端的材料，并按照安瓿破碎器隨附的制造商說明進行操作,。

7. 材料的使用

在重新配制之前,，不應(yīng)嘗試稱量凍干材料的任何部分

a。如上文第 6 節(jié)所述打開安瓿瓶,。

b,。在室溫下用 100μl 無核酸酶水復(fù)溶凍干材料。

C,。使用移液器將樣品轉(zhuǎn)移到無核酸酶管中,，確保收集最大可用量。

d,。讓材料在室溫下復(fù)溶 1 小時,，然后用移液管充分混合。 1x Tris-EDTA 緩沖液中的 DNA 濃度現(xiàn)在約為 50ng/μl,，但建議在使用前使用自己的定量方法進行確認,。不必擔心材料中可能出現(xiàn)的白色斑點。

e.這種變體材料可以與材料 18/164（野生型）結(jié)合以產(chǎn)生任何選擇的變體百分比的標準

F,。將所需的量添加到您的檢測中。材料可以進一步稀釋（用無核酸酶水或合適的緩沖液）,，以達到適合您檢測的 DNA 濃度,。

G。應(yīng)在同一測定中分析初級和二級標準,，以將值分配給二級標準,。